Orceina A y orcenia B

La orceína A reblandece las membranas celulares y la B completa el proceso de tinción. Con la presión sobre el porta de la preparación se logra una extensión y difusión de las células del meristemo de la cebolla. La preparación presenta el aspecto de una dispersión de células por todo el campo que abarca el microscopio. Se observan células en diversas fases o estados de división celular. Se ven los cromosomas teñidos de morado por la orceína. El aspecto reticulado así como el mayor tamaño de algunos núcleos corresponde a las células que se encontraban en los procesos iniciales de la división mitótica.

Cromatografía de pigmentos fotosintéticos

Objetivo:

Extraer los pigmentos fotosintéticos y separarlos mediante una técnica sencilla de cromatografía en papel.

Materiales:

    -Hojas de espinacas
    -Mortero
    -Alcohol.
    -Carbonato cálcico
    -Embudo
    -Placa petri
    -Rectángulo 15cm de ancho y 10cm de largo.

Técnica:

1. Lavar las hojas de espinacas, retirar los nervios y ponerlas en un mortero, junto con el alcohol y una pequeña cantidad de carbonato cálcico (que evita la degradación de los pigmentos fotosintéticos).
2. Filtrar con un embudo y papel de filtro. 
3. Triturar la mezcla hasta que las hojas se decoloren y el disolvente adquiera un color verde intenso.
4. Colocar el filtrado en una placa Petri, y sobre ella pon un rectángulo de unos 15 centímetros de ancho por 10 centímetros de alto doblado en V para que se mantenga en pie sobre la placa de Petri.
5. Dejar reposar unas horas.
6. Al observar el papel donde hemos hecho la cromatografía, vemos cuatro bandas o zonas (figura A), que corresponden a los distintos pigmentos fotosintéticos presentes en las hojas de espinaca. Según su grado de solubilidad con el alcohol se reconocen estas bandas y en este orden: 
   Figura A
   1. clorofila b
   2. clorofila a
   3. xantofila
   4. carotenos

Este es el aspecto final de la cromatografía obtenida con las hojas de espinacas.

Mitosis en una célula vegetal

Materiales:
         
          -Pinzas
          -Cebolla
          -Vidrio de reloj
          -Orceina acética
          -Soplete
          -Lanceta
          -Porta

Procedimiento:

Unos días antes de realizar esta actividad se han puesto cebollas en agua para estimular el crecimiento de las raices. Cuando estas han comenzado su crecimiento, con independencia de la longitud que alcanza, ya puede observarse la mitosis.

1.- Con ayuda de unas pinzas, toma una raiz arrancandola desde la base. Y ponla en un vidrio de reloj

2.- Añadir orceina acética recién filtrada hasta que se forme un circulo de un tamaño semejante al de una moneda de 500 pesetas. La raíz, o al menos su ápice, puede quedar dentro de la orceina.

3.- Tomando el vidrio con unas pinzas calentar suavemente. No mantener el vidrio de reloj sobre la llama más de 5 segundos seguidos. Cada cinco segundos retirarlo de la llama y tocar la parte de abajo del vidrio con los dedos. El calor debe ser tal que se soporte perfectamente. Hacer esto durante cinco minutos.

4.- Sacar la raíz de la orceina con ayuda de la lanceta y ponerla en el centro de un porta bien limpio.

5.- Con las pinzas, coger la raíz por su base. Se puede distinguir de la punta porque esta es más redondeada, mientras que la base es más recta. Con la lanceta cortar 2mm de la punta, dejar en el porta este pequeño trozo y tirar el resto.

6.- Sobre la parte cortada, encima del porta, poner una gota de orceina.

7.- Tapar con un cubre muy limpio.

8.- Poner encima un trozo de papel doblado varias veces y apoyar con fuerza el dedo pulgar apoyando todo el peso del cuerpo sobre él.

9.- Colocar la preparación en el microscopio y buscar la zona en que están las células del meristemo.  Una vez localizadas algunas fases de la mitosis pasar al máximo aumento para una observación más detallada.

10.- Se verán células en proceso de diferenciación (células más alargadas).

Extracción de ADN

Introducción

La práctica la pudimos realizar en una cocina normal, como se puede realizar en un laboratorio de un centro. La extracción de ADN requiere hacer varias series de etapas básicas. En primer lugar tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. Después debe romperse igual la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por último hay que proteger el ADN de enzimas que puedan disminuirlo y para aislarlo hay que hacer que se precipite en alcohol. El ADN es soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interface entre el alcohol y el agua. Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en la solución acuosa. La sal evita la unión de las proteínas al ADN.
Objetivos
-Realizar la extracción de ADN de tejidos animales y vegetales y reflexionar sobre la simpleza de su composición con sencillas técnicas.
- Observar la estructura fibrilar del ADN.

Material necesario
- Muestra vegetal (cebolla, ajó, tomate, etc.)
- Agua (destilada o mineral)
- Sal de mesa
- Bicarbonato sódico
- Detergente líquido o champú
- Alcohol isoamílico a 0°C
- Batidora
- Nevera
- Colador o centrífuga
- Vaso
- Tubo de ensayo
- Varilla fina

Procedimiento

1.- Preparar el tampón con los siguientes ingredientes y mantener en la nevera o en un baño de hielo triturado:

• 120 ml de agua, si es posible destilada y si no mineral. No usar agua del grifo.
  
• 1,5 g de sal de mesa, preferiblemente pura.
  
• 5 g de bicarbonato sódico.
  
• 5 ml de detergente líquido o champú.
  

2-. Elegir la muestra que va a proporcionar el ADN entre los vegetales que pueda haber en la cocina (cebolla, ajo, tomates, etc.) y cortarla en cuadraditos.
3.- Triturar la muestra con un poco de agua en la batidora accionando las cuchillas a impulsos de 10 segundos. Y así se romperán muchas células y otras quedarán expuestas a la acción del detergente.
4.- Mezclar en un recipiente limpio 5 ml del triturado celular con 10 ml del tampón frío y agitar vigorosamente durante al menos 2 minutos. Separar después los restos vegetales más grandes del caldo molecular haciéndolo pasar por un colador lo más fino posible. Lo ideal es centrifugar a baja velocidad 5 minutos y después pipetear el sobrenadante.
5.- Retirar 5 ml del caldo molecular a un tubo de ensayo y añadir con pipeta 10 ml de alcohol isoamílico enfriado a 0ºC. Se tiene que dejar escurrir lentamente el alcohol por la cara interna del recipiente, teniendo éste inclinado. El alcohol va a quedar flotando sobre el tampón.
6- Se introduce la punta de una varilla estrecha hasta justo debajo de la separación entre el alcohol y el tampón. Remover la varilla hacia delante y hacia atrás y poco a poco se irán enrollando los fragmentos de mayor tamaño de ADN. Pasado un minuto retirar la varilla atravesando la capa de alcohol con lo cual el ADN quedará adherido a su extremo con el aspecto de un copo de algodón mojado.

Notas:

• Si se quiere realizar una extracción "profesional" puedes agregar enzimas que lo puede hacer mejor, y el producto que resultaría seria pura.
  
• Cuando añadas el alcohol frío debes hacerlo de forma que resbale por las paredes del tubo para que forme una capa sobre el filtrado. Para realizarlo mejor puedes utilizar la varilla de vidrio o una cucharilla para ayudarte.
  
• Si se expone por mucho tiempo la muestra vegetal a rayos ultravioletas, esto provoca daños sobre la estructura del ADN, o aplicar ciertos conservantes que puedan provocar efectos sobre la cadena del ADN.
  

Resultados y explicación

El producto filamentoso obtenido de la extracción no es ADN puro ya que, entremezclado con él, hay fragmentos de ARN. Una extracción "profesional" se realiza añadiendo enzimas que fragmentan las moléculas de ARN e impiden que se unan al ADN.

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